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試樣配制時,造成定量誤差的因素有哪些?

在反相色譜中,甲醇和乙腈是最常用的二種有機試劑,由于二者性質的差異,在使用中有一定的區別。

1價格,乙腈高于甲醇

在分析成本上,HPLC級的乙腈,價格比HPLC級的甲醇高的多。因此,一般的液相色譜分析有機試劑首選甲醇為多。但文獻所示的條件多用乙腈。

2吸光度,乙腈低于甲醇

所謂的HPLC級是指除去具有吸收UV的物質,其在規定的吸收波長上的吸光度小于規格值,但并不是指絕對的純度高。

從這四種試劑的吸收光譜看,HPLC級的乙腈吸收最小,尤其在低波長上。因此在UV檢測時,其產生的噪音最小,在低波長尤其明顯。所以在UV的低波長上,高靈敏度檢測用HPLC的乙腈最合適。另外,在UV的梯度檢測上,HPLC的乙腈產生的鬼峰最少,同時由于其低的吸收值,梯度變化其吸收值變化最小,較大范圍內的反相有機試劑梯度用HPLC乙腈最適宜。

甲醇的HPLC級和優級的吸收光譜相差不大,但優級不能保證吸光度,因此還是盡量使用HPLC級。

3壓力,乙腈低于甲醇

色譜柱內的壓力,同很多因素有關,包括長度、內徑、顆粒大小、填料性質、流速、溫度及流動相等。但在實際分析過程中,影響壓力變化主要是流動相中有機溶劑和緩沖液混合比例的不同,圖中表示了水/乙腈,水/甲醇混合液的比例與壓力的關系。從圖中可以看到,甲醇與水混合壓力增高,而乙腈同樣與水混合并不如此,乙腈明顯優于甲醇。同時我們也看到溫度對壓力的影響,溫度升高,壓力下降。

4流動相脫氣,乙腈要注意

這里只討論預先混合的流動相配置問題。甲醇與水混合時會發熱,溫度升高,多余溶解的空氣較易變為脫出氣泡,容易脫氣。而乙腈與水混合是吸熱反應,隨著溫度慢慢回到室溫,產生氣泡,所以要考慮脫氣。

5洗脫強度,一般而言,乙腈大于甲醇

乙腈和甲醇與水混合二者比例相同,一般情況下,乙腈的洗脫能力強,尤其是混合比例低時。例如從咖啡因和苯酚的洗脫看,相同的保留時間,乙腈的比率只需甲醇的一半都不到,而另一方面,當有機溶劑100%或與此非常接近時,對于胡蘿卜素和膽甾醇來看,甲醇的洗脫能力往往比乙腈強。

6分離選擇性,有差異

乙腈和甲醇在分離的選擇性上有一定的差異,尤其是極性或離子化合物,出峰次序往往會不一致。在圖4中,苯酚和苯甲酸的洗脫次序改變。這是由于有機溶劑的化學性質不同所致(甲醇是質子性,乙腈是非質子性)。因此,當用乙腈(甲醇)不能獲得良好分離時可以試試甲醇(乙腈)。

7峰形,有時出現差異

對于像水楊酸化合物等,用乙腈時脫尾大,用甲醇則可抑制脫尾。這是由于對于硅表面與目標成分有相互作用的流動相的有關方,因有機溶劑分子的化學性質不同而異,或者是對成分溶解能力的差異所造成的。

可是,一般情況下,聚合物反相柱在使用甲醇時比硅膠柱更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙稀柱分析芳香族化合物時常見,而用乙腈則效果好的多。

8結論

總之,對于反相色譜中常用的乙腈和甲醇,一般情況下使用HPLC乙腈效果最好,但用乙腈達不到效果時,可以試試HPLC級甲醇。

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